噬菌體篩選展示技術(shù)經(jīng)近20年的發(fā)展和完善，已被廣泛應(yīng)用于抗原抗體庫的建立、藥物設(shè)計、疫苗研究、病原檢測、基因治療、抗原表位研究及細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究等。噬菌體展示系統(tǒng)模擬了自然免疫系統(tǒng)，使我們有可能模擬體內(nèi)抗體生成過程，構(gòu)建高親和力抗體庫。由于噬菌體展示技術(shù)實現(xiàn)了基因型和表型的有效轉(zhuǎn)換，使研究者在基因分子克隆基礎(chǔ)上實現(xiàn)了蛋白質(zhì)構(gòu)象體外控制，從而為獲取具有良好生物學(xué)活性的表達(dá)產(chǎn)物提供了強(qiáng)有力手段。另外，噬菌體展示技術(shù)已成為不經(jīng)過免疫獲取特異性人源抗體的新途徑，為獲取對人類和動物疾病有診斷和治療價值的單克隆抗體提供了重要手段。
噬菌體展示技術(shù)是將多肽或蛋白質(zhì)的編碼基因插入噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，在閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常功能的情況下，使外源多肽或蛋白與外殼蛋白融合表達(dá)，融合蛋白隨子代噬菌體的重新組裝而展示在噬菌體表面。展示到噬菌體表面的多肽或蛋白保持相對獨立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，可以與靶分子結(jié)合和識別。噬菌體展示的肽庫或蛋白庫與固相抗原結(jié)合，洗去未結(jié)合的噬菌體，然后用酸堿或者競爭的分子洗脫下結(jié)合的噬菌體，中和后的噬菌體感染大腸桿菌擴(kuò)增，經(jīng)過3-5輪的富集，逐步提高可以特異性識別靶分子的噬菌體比例，終獲得識別靶分子的多肽或者蛋白。
用抗體作為噬菌體篩選的蛋白，從噬菌體展示的隨機(jī)多肽庫中，篩選出可以與抗體特異性結(jié)合的噬菌體，經(jīng)測序分析，獲得該抗體識別的抗原表位。該技術(shù)為抗原抗體反應(yīng)機(jī)制研究，診斷試劑開發(fā)，疫苗制備等提供依據(jù)。
目前的表位鑒定技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)：
1.單抗藥物及診斷用單抗的制備；
2.研制包括“通用”目標(biāo)在內(nèi)的治療性和預(yù)防性重組多價肽疫苗；
3.研制單表位或重組多表位肽檢測抗原；
4.篩選基于表位基序的疾病、腫瘤等新的特異診斷標(biāo)志物；
5.高通量發(fā)現(xiàn)同源蛋白中全部保守性和特異性表位；
6.篩選功能性抗體表位或者抗體中和性及可及性表位；
7.為表位水平分析病毒遺傳進(jìn)化和變異，提供抗原漂移和轉(zhuǎn)移的直接證據(jù)。
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更新時間：2020-07-07
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